实验室常用贮存液的配制(1)

作者:李成文(原北京军事医学科学院主任)
1 . 30% 丙烯酰胺溶液

【配制方法】将 29g 丙烯酰胺和 1g N N ’ - 亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的水中。加热至 37 ℃ 溶解之,

补加水至终体积为 100ml 。用 Nalgene 滤器( 0.45 μ m 孔径)过滤除菌,查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0 ,置棕色 瓶

中保存于室温。

【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯

胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价

较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约 0.2 体积的单床混合树脂( M B-

1Mallinckrodt ),搅拌过夜,然后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢

转化成丙烯酰和双丙烯酸。


2 40% 丙烯酰胺

【配制方法】把 380g 丙烯酰胺( DNA 测序级)和 20g N N ’ - 亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 600ml 的蒸馏水 中 。

继续按上述配制 30% 丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为 1L

【注意】见上述配制 30% 丙烯酰胺的说明, 40% 丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定。


3 .放线菌素 D 溶液

【配制方法】把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4ml 100% 乙醇中, 1 10 稀释贮存液,用 100% 乙醇作空白对照读取

OD440 值。放线菌素 D (分子量为 1255 )纯品在水溶液中的摩尔消化系数为 21 900 ,故而 1mg/ml 的放线菌素 D

溶液在 440nm 处的吸光值为 0.182 ,放线菌素 D 的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于 -20 ℃

【注意】放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验 桌

面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

药厂提供的作治疗用途的放线菌素 D 制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在 440nm 波长处的光

吸收确定放线菌素 D 的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。


4 0.1mol/L 腺苷三磷酸( ATP )溶液

【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP, 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0 ,用蒸馏水定容 1ml ,分装成小

份保存于 -70 ℃


5 10mol/L 乙酸酰溶液

【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中,加水定容至 1L 后过滤除菌。


6 10% 过硫酸铵溶液

【配制方法】把 1g 过硫酸铵溶解于终量为 10ml 的水溶液中,该溶液可在 4 ℃ 保存数周。


7 BCIP 溶液

【配制方法】把 0.5g 5- -4- -3- 吲哚磷酸二钠盐( BCIP )溶解于 10ml 100% 的二甲基甲酰胺中,保存于 4 ℃


8 2 × BES 缓冲盐溶液

【配制方法】用总体积 90ml 的蒸馏水溶解 1.07g 盐溶液 BES[N N- 双( 2- 羟乙基) -2- 氨基乙磺酸 ] 1.6g NaC l

0.027g Na2HPO4 ,室温下用 HCl 调节 该溶液的 pH 值至 6.96 、然后加入蒸馏水定容至 100ml ,用 0.22 μ m 滤器

过滤除菌,分装成小份,保存于 -20 ℃


9 1mol/L CaCl2 溶液

【配制方法】在 200ml 蒸馏水中溶解 54g CaCl2?6H2O ,用 0.22 μ m 滤器过滤除菌,分装成 10ml 小份贮存于 -2 0 ℃

【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至 100ml ,用 Nalgene 滤器( 0.45 μ m 孔径)过 滤

除菌,然后骤冷至 0 ℃