蛋白溶液的浓缩

作者:李成文(原北京军事医学科学院主任)

蛋白溶液的浓缩技术,目前常用的有化学吸水剂浓缩,透析袋表面蒸发浓缩、超过滤浓缩及冷冻干燥等方法。


    1、化学吸水剂浓缩:

    将浓缩前的蛋白液装入透析袋中,把透析袋外边覆盖上干的吸水剂,像聚乙二醇(PEG)或者聚乙烯吡咯烷酮(Polyvlny1Prrolidine Pvp)等,也可以将装有样品的透析袋浸于20%~30%PEG溶液中,浓缩至所需体积,即可将样品取出。

    当要浓缩小体积的样品时,也可以用交联度高的凝胶颗粒(如SePhadex G-25)或干燥的聚丙烯酰胺凝胶条(T)10%以上)直接放到待浓缩的样品液中,当凝胶膨胀后即吸收部分水分以达到浓缩目的。

   

    2、蒸发法:

    将待浓缩的溶液置于透析袋中,然后将透析袋挂在冰箱中,或用电扇吹风。水分通过半透膜扩散并蒸发。此法随简便易行,但效率低。且浓缩后样品盐分高,适宜小体积,时间不紧迫的情况下采用此方法。


    3、超过率法:

    超过滤法浓缩各种大分子溶液,具有速度快、不影响生物活性、不消耗任何试剂,同事还可以用脱盐及去除小分子杂质相结合等优点,它是当前免疫化学与生物化学中浓缩**方法,操作步骤同脱盐的几点。


    4、冷冻干燥法:

    生物样品的冷冻干燥方法,即是制备**或长期保存样品的手段,也是高分子溶液的浓缩的较好方法,在具备冷冻设备的条件下都可以进行。

    主要技术要点:

    (1)样品的处理,如果干燥前样品浓度低于1mg/ml,或者冻干过程会被破坏其生物活性,需要预先加入一定浓度的蛋白保护剂。

    (2)预冷样品,常用乙醇干冰或低温冰箱预冻,将蛋白液薄薄的预冻在干燥的容器壁上。

    (3)低温干燥因干燥机种类较多,操作不一,不再赘述。